ในสถานที่ปฏิบัติการ นักวิจัยมักต้องเผชิญกับการเตรียมสารแก้ไขพัฟเฟอร์ชื่อเสียงด้วยความสามารถในการระบายความหนาวที่โดดเด่น และความละลายในน้ําที่ดี, ได้กลายเป็นสิ่งจําเป็นในสาขาวิชาวิทยาศาสตร์ต่าง ๆ รวมถึงชีววิทยาโมเลกุลและพืชศาสตร์ความชื่นชอบในการปฏิกิริยากับไอออนโลหะบางชนิด (เช่นแคลเซียมและแม็กนีเซียม) และหลั่งลงในสารละลายเอธานอล เป็นปัญหาในการทดลองที่สําคัญบทความนี้ให้โปรโตคอลรายละเอียดสําหรับการเตรียมพัฟเฟอร์โปแทสเซียมฟอสเฟต 1M ที่ pH 6.5, ให้ผู้วิจัยมีทางออกที่น่าเชื่อถือ สําหรับความต้องการการทดลองของพวกเขา
ปอตัสเซียมฟอสเฟตพัฟเฟอร์ หรือก็เรียกว่า ปอตัสเซียมโฟสเฟตโฟสเฟตโฟสเฟตโฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟตโฟสเฟต โฟสเฟ2โปรโมชั่น4) และโปแทสเซียมฟอสเฟตไดเบซิก (K2HPO4) ระบบพัฟเฟอร์นี้มีข้อดีหลายอย่าง ได้แก่ ความสามารถในการพัฟเฟอร์ที่สูงกว่า ความละลายในน้ําสูง และประหยัดนักวิจัยควรทราบว่า แบฟเฟอร์นี้ปฏิกิริยากับไอออนโลหะ เช่น แคลเซียมและแม็กนีเซียม, ซึ่งอาจยับยั้งกิจกรรมของเอนไซม์และเป็นฝุ่นในสารแก้ไขเอธานอล
ถึงแม้ว่าจะมีข้อจํากัดเหล่านี้ แต่ปอตัสเซียมฟอสเฟตเปาเฟอร์ยังคงเป็นสัญลักษณ์หลักในการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และโปรโตคอลในการทําความสะอาดโปรตีนปริมาณ pH ของพัฟเฟอร์สามารถปรับได้อย่างแม่นยํา โดยการปรับปรุงสัดส่วนของส่วนประกอบโฟสเฟตสองส่วนของมัน ทําให้มันปรับตัวได้ตามความต้องการการทดลองที่หลากหลาย
ระเบียบปฏิบัติต่อไปนี้รายละเอียดการเตรียม 1 ลิตรของ 1M โปแทสเซียมฟอสเฟตพัฟเฟอร์ที่ pH 6.5:
| สารปฏิกิริยา | น้ําหนักโมเลกุล (g/mol) | จํานวน (g) | คอนเซ็นทรัลปลาย (mM) |
|---|---|---|---|
| โปแทสเซียมไดฮิโดรเจนฟอสเฟต (KH)2โปรโมชั่น4) | 136.09 | 95 | 698.067 |
| ไดโปแทสเซียมไฮโดรเจนฟอสเฟต (K)2HPO4) | 174.18 | 52.5 | 301.412 |
ระเบียบการเตรียม
- การเตรียมการเริ่มต้น:เติมน้ํากระป๋อง 800 mL ลงในถังที่เหมาะสม
- การละลายของ KH2โปรโมชั่น4:เพิ่ม 95 กรัมโปแทสเซียมฟอสเฟต monobasic ไปยังน้ํา โดย stirring ต่อเนื่องจนกระทั่งการละลายอย่างสมบูรณ์แบบ
- การละลายของ K2HPO4:ใส่ 52.5 กรัมของโปแทสเซียมฟอสเฟตไดเบซิกเข้าไปในสารละลาย โดยต่อการ stirring
- การปรับ pH:ใช้เครื่องวัด pH ที่ปรับระดับ ให้ละเอียดปรับ pH ของสารละลายให้เป็น 6.5 ด้วยสารละเอียดของกรดไฮโดรคลอริก หรือโพแทสเซียมไฮโดรออกไซด์ดําเนินการปรับปรุงค่อย ๆ กับการผสมผสานอย่างละเอียดระหว่างการเพิ่ม.
- การปรับปริมาณสุดท้าย:นําสารละลายมาในปริมาณสุดท้าย 1 ลิตร ด้วยน้ําระบาย และผสมให้ดี
- การฆ่าเชื้อ:สกรองสารละลายผ่านเครื่องกรองเยื่อ 0.22 μm เพื่อการฆ่าเชื้อ อัลลิคอทพัฟเฟอร์ที่เป็นเชื้อเพลิงเพื่อลดวงจรการแข็ง-ละลายให้น้อยที่สุด
- การเก็บรักษา:เก็บความร้อนในอุณหภูมิห้อง สําหรับการเก็บรักษายาวนาน ต้องเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C
- คุณภาพของสารปฏิกิริยา:ใช้สารปฏิกิริยาประเภทวิเคราะห์หรือความบริสุทธิ์สูงกว่า เพื่อป้องกันการแทรกแซงการทดลองจากสารสกปรก
- คุณภาพน้ําใช้น้ําที่ระบายน้ํา หรือน้ําที่ระบายไอโอเนียส์ที่มีคุณภาพสูง เพื่อหลีกเลี่ยงการนําสารปนเปื้อนเข้า
- การปรับระดับ pH Meter:ตัดค่าวัด pH ด้วยพัฟเฟอร์มาตรฐานก่อนการใช้
- การผสม:ให้แน่ใจว่าผสมให้ละเอียด ระหว่างทุกขั้นตอนของการเตรียม
- เทคนิคการรักษาด้วยยาล้างรักษาสภาพที่เป็นบริสุทธิ์อย่างเข้มงวดระหว่างการกรอง
- สภาพการเก็บรักษา:เก็บไว้ในสภาพเย็นและมืด เพื่อรักษาความสมบูรณ์แบบของพัฟเฟอร์
นักวิจัยสามารถเพิ่มประสิทธิภาพการทดลอง โดยการเตรียมสารสต็อปดันซึม (5M หรือ 10M) สําหรับการละลายต่อมาระยะ pH ของพัฟเฟอร์สามารถปรับปรุงโดยการเปลี่ยนแปลงสัดส่วนส่วนของฟอสฟาตในการทดลองที่เกี่ยวข้องกับกระบวนการที่มีความรู้สึกต่อโลหะ พิจารณาเพิ่ม EDTA เป็นตัวแทน chelatingการควบคุมอุณหภูมิเป็นสิ่งจําเป็นสําหรับการใช้งานที่มีความรู้สึกต่อ pH.
ขณะที่พัฟเฟอร์โปแทสเซียมฟอสเฟตให้บริการกับการใช้งานหลายอย่างอย่างมีประสิทธิภาพ ระบบพัฟเฟอร์ทางเลือกอาจเป็นที่ชอบในสถานการณ์เฉพาะเจาะจงทริสพัฟเฟอร์พิสูจน์ว่ามีค่า เมื่อการแทรกแซงฟอสฟาตเป็นปัญหา, ขณะที่ HEPES buffer มีข้อดีสําหรับการนําไปใช้ในการปลูกเซลล์ เนื่องจากมีพิษต่อเซลล์ที่ต่ํากว่าการคัดเลือกพัฟเฟอร์ควรถูกนําโดยความต้องการการทดลองและการพิจารณาความขัดแย้งที่เป็นไปได้.
การเรียนรู้วิธีการจัดเตรียม 1M โปแทสเซียมฟอสเฟตพัฟเฟอร์ ที่ pH 6.5 เป็นทักษะพื้นฐานในห้องปฏิบัติการรวมไปถึงความเข้าใจเกี่ยวกับคุณสมบัติและข้อจํากัดของพัฟเฟอร์, ทําให้นักวิจัยสามารถทําการทดลองได้อย่างมั่นใจและแม่นยํา