در محیط آزمایشگاهی، محققان اغلب با آماده سازی خسته کننده محلول های بافر دست و پنجه نرم می کنند.به خاطر ظرفیت استثنایی بافری و محلول بودن عالی در آب شناخته شده است، در رشته های مختلف علمی از جمله زیست شناسی مولکولی و گیاه شناسی ضروری شده است.تمایل آن به واکنش با یون های فلزی خاص (مانند کلسیم و منیزیم) و رسوب در محلول های اتانول چالش های تجربی قابل توجهی را ایجاد می کنداین مقاله یک پروتکل مفصل برای آماده سازی 1M پوتاسیوم فسفات بافر در pH 6 ارائه می دهد.5، ارائه محققان یک راه حل قابل اعتماد برای نیازهای تجربی خود.
پوتاسیوم فسفات بافر، همچنین به عنوان پوتاسیوم گوموری شناخته می شود، شامل مخلوط فوسفات پتاسیم مونوباسیک (KH) است.2دفتر کار4) و فوسفات پتاسیم دیباز (K)2HPO4) این سیستم بافر دارای مزایای متعددی است: ظرفیت بافر برتر، محلولیت آب بالا و مقرون به صرفه.محققان باید آگاه باشند که این بافر با یون های فلزی مانند کلسیم و منیزیم واکنش نشان می دهد.، که ممکن است فعالیت آنزیم را مهار کند و در محلول های اتانول رطوبت ایجاد کند، یک توجه مهم برای آزمایشات آماده سازی اسید نوکلئیک است.
با وجود این محدودیت ها، پوتاسیوم فسفات بافر همچنان یک ماده اصلی در تحقیقات علمی است.و پروتکل های تصفیه پروتئینpH بوفر را می توان با تغییر نسبت دو جزء فسفات آن به طور دقیق تنظیم کرد و آن را سازگار با نیازهای مختلف تجربی می کند.
پروتکل زیر جزئیات آماده سازی یک لیتر پوتاسیوم فسفات 1M با pH 6 را نشان می دهد.5:
| ماده واکنش دهنده | وزن مولکولی (g/mol) | مقدار (g) | غلظت نهایی (mM) |
|---|---|---|---|
| فوسفات دی هیدروژن پتاسیم (KH)2دفتر کار4) | 136.09 | 95 | 698.067 |
| دیپوتاسیوم هیدروژن فسفات (K)2HPO4) | 174.18 | 52.5 | 301.412 |
پروتکل آماده سازی:
- آماده سازی اولیه:800 میلی لیتر آب تقطیر شده را به یک ظروف مناسب اضافه کنید.
- انحلال KH2دفتر کار4:95 گرم فوسفات پتاسیم مونوباسیک را به آب اضافه کنید و به طور مداوم تکان دهید تا به طور کامل حل شود.
- انحلال K2HPO4:52.5 گرم فوسفات پتاسیم دیباسیک را به محلول اضافه کنید و به حرکت ادامه دهید.
- تنظیم pH:با استفاده از یک پی اچ متر کالیبراسیون شده، محلول را به دقت به pH 6.5 با محلول هیدروکلریک اسید رقیق شده یا هیدروکسید پتاسیم تنظیم کنید.انجام تنظیمات به تدریج با مخلوط کامل بین افزونه ها.
- تنظیم نهایی حجم:محلول را به حجم نهایی یک لیتر با آب تقطیر شده بیاورید و به خوبی مخلوط کنید.
- تعقيم:محلول را از طریق یک فیلتر غشا 0.22 μm برای استریلیزه کردن فیلتر کنید.
- ذخیره سازی:آب پاشی فیلتر شده را در دمای اتاق نگهداری کنید.
- کیفیت واکنش دهنده:برای جلوگیری از دخالت های تجربی ناشی از ناخالصی ها، از واکنشگرهای درجه تحلیلی یا خالصیت بالاتر استفاده کنید.
- کیفیت آب:برای جلوگیری از وارد شدن آلاینده ها، از آب تقطیر شده یا غیر یونیزه شده با کیفیت بالا استفاده کنید.
- کالیبراسیون pH Meter:همیشه قبل از استفاده، پی اچ متر را با بافرهای استاندارد کالیبراسیون کنید.
- مخلوط کردن:در تمام مراحل آماده سازی، از مخلوط کردن دقیق اطمینان حاصل کنید.
- روش آسپتیک:در طول فیلتر کردن شرایط استریل دقیق را حفظ کنید.
- شرایط نگهداری:برای حفظ یکپارچگی بافر، در شرایط سرد و تاریک نگهداری کنید.
محققان می توانند با آماده سازی محلول های اصلی متمرکز (5M یا 10M) برای رقیق شدن بعدی، کارایی آزمایش را افزایش دهند.محدوده pH بافر را می توان با تغییر نسبت های جزء فسفات تغییر داددر آزمایشاتی که شامل فرآیندهای حساس به فلزات است، اضافه کردن EDTA به عنوان یک عامل کلر را در نظر بگیرید.کنترل دما برای کاربردهای حساس به pH ضروری است.
در حالی که بوفر فوسفات پتاسیم به طور موثر به بسیاری از کاربردهای مختلف خدمت می کند، سیستم های بوفر جایگزین ممکن است در شرایط خاص ترجیح داده شود.بازدارنده تريس وقتي که مداخله فوسفات مشکل ساز باشه، ارزش داره، در حالی که بافر HEPES به دلیل سمیت سلولی پایین تر، مزایای زیادی برای کاربردهای کشت سلولی دارد.انتخاب بافر باید بر اساس الزامات تجربی و ملاحظات احتمالی تداخل هدایت شود..
تسلط بر آماده سازی 1M پوتاسيوم فوسفات با pH 6.5 نشان دهنده یک مهارت آزمایشگاهی اساسی است.در ترکیب با درک خواص و محدودیت های بافر، محققان را قادر می سازد تا آزمایشات را با اطمینان و دقت انجام دهند.