Im Labor müssen die Forscher häufig mit der mühsamen Herstellung von Pufferlösungen zu kämpfen haben.bekannt für seine außergewöhnliche Pufferfähigkeit und seine hervorragende Wasserlöslichkeit, ist in verschiedenen wissenschaftlichen Disziplinen, einschließlich Molekularbiologie und Botanik, unverzichtbar geworden.Die Tendenz, mit bestimmten Metallionen (z. B. Kalzium und Magnesium) zu reagieren und in Ethanollösungen zu präparieren, stellt bemerkenswerte experimentelle Herausforderungen dar.Dieser Artikel enthält ein detailliertes Protokoll zur Zubereitung von 1M Kaliumphosphatpuffer bei pH 6.5, die Forschern eine zuverlässige Lösung für ihre experimentellen Bedürfnisse bietet.
Kaliumphosphatpuffer, auch bekannt als Gomori-Puffer, besteht aus einer Mischung aus monobasischem Kaliumphosphat (KH)2Dienststelle4) und Kaliumphosphat (K2HPO4Dieses Puffersystem bietet mehrere Vorteile: überlegene Pufferkapazität, hohe Wasserlöslichkeit und Kosteneffizienz.Forscher sollten sich bewusst sein, dass dieser Puffer mit Metallionen wie Kalzium und Magnesium reagiert, die die Enzymaktivität hemmen und in Ethanollösungen Niederschläge bilden können, eine kritische Überlegung für Versuche zur Zubereitung von Nukleinsäuren.
Trotz dieser Einschränkungen ist der Kaliumphosphatpuffer nach wie vor ein Grundnahrungsmittel in der wissenschaftlichen Forschung.und ProteinreinigungsprotokolleDer pH-Wert des Puffers kann durch Änderung des Verhältnisses seiner beiden Phosphatbestandteile genau angepasst werden, so daß er sich an verschiedene Versuchsanforderungen anpassen kann.
Das folgende Protokoll beschreibt detailliert die Zubereitung eines Liters 1M Kaliumphosphatpuffer bei pH 6.5:
| Reagenzmittel | Molekulares Gewicht (g/mol) | Menge (g) | Endkonzentration (mM) |
|---|---|---|---|
| Kaliumdihydrogenphosphat (KH)2Dienststelle4) | 136.09 | 95 | 698.067 |
| Dipotassiumwasserstoffphosphat (K)2HPO4) | 174.18 | 52.5 | 301.412 |
Vorbereitungsprotokoll:
- Erste Vorbereitung:800 ml destilliertes Wasser in einen geeigneten Behälter geben.
- Auflösung von KH2Dienststelle4:95 g monobasisches Kaliumphosphat werden mit kontinuierlichem Rühren bis zur vollständigen Auflösung in das Wasser gegeben.
- Auflösung von K2HPO4:52,5 g dibasisches Kaliumphosphat in die Lösung einfügen und weiter rühren.
- pH-Anpassung:Mit einem kalibrierten pH-Meter wird die Lösung mit verdünnter Salzsäure oder Kaliumhydroxidlösung sorgfältig auf pH 6,5 eingestellt.Durchführen Sie die Anpassungen allmählich mit gründlichem Mischen zwischen den Ergänzungen.
- Endgültige Volumenanpassung:Die Lösung wird mit destilliertem Wasser auf ein endgültiges Volumen von einem Liter gebracht und gründlich gemischt.
- Sterilisation:Die Lösung wird für die Sterilisation durch einen 0,22 μm-Membranfilter gefiltert.
- AufbewahrungBewahren Sie den gefilterten Puffer bei Raumtemperatur auf.
- Reagenzqualität:Verwenden Sie Reagenzien von analytischer Qualität oder höherer Reinheit, um Versuchsinterferenzen durch Verunreinigungen zu vermeiden.
- Wasserqualität:Verwenden Sie hochwertiges destilliertes oder deionisiertes Wasser, um Verunreinigungen zu vermeiden.
- Kalibrierung des pH-Messers:Die pH-Messung muss vor dem Gebrauch immer mit Standardpuffern kalibriert werden.
- Mischen:Während aller Vorbereitungsphasen sorgfältig mischen.
- Die aseptische Technik:Während der Filtration werden strenge sterile Bedingungen eingehalten.
- Aufbewahrung:Aufbewahren unter kühlen, dunklen Bedingungen, um die Integrität des Puffers zu bewahren.
Die Forscher können die Effizienz der Versuche verbessern, indem sie konzentrierte Grundlösungen (5M oder 10M) zur späteren Verdünnung vorbereiten.Der pH-Bereich des Puffers kann durch Änderung der Phosphatverhältnisse geändert werdenIn Versuchen mit metallempfindlichen Verfahren sollte EDTA als Chelatmittel hinzugefügt werden.Die Temperaturkontrolle ist für pH-empfindliche Anwendungen unerlässlich.
Während Kaliumphosphatpuffer viele Anwendungen wirksam bedienen, können alternative Puffersysteme unter bestimmten Umständen bevorzugt werden.Tris-Puffer erweist sich als wertvoll, wenn Phosphatinterferenzen problematisch sind., während der HEPES-Puffer aufgrund seiner geringeren zellulären Toxizität Vorteile für Zellkulturanwendungen bietet.Bei der Auswahl des Puffers sollten Versuchsanforderungen und mögliche Interferenzen berücksichtigt werden..
Die Vorbereitung von 1M Kaliumphosphat-Puffer bei pH 6,5 ist eine grundlegende Laborkunst.kombiniert mit dem Verständnis der Eigenschaften und Einschränkungen des Puffers, ermöglicht es Forschern, Experimente mit Zuversicht und Präzision durchzuführen.