研究室では,研究者はしばしば 緩衝溶液の 退屈な準備と闘います.特殊なバッファ能力と優れた水溶性で知られています生物学や植物学など様々な科学分野において不可欠なものになっています.特定の金属イオン (カルシウムやマグネシウムなど) と反応し,エタノール溶液に沈着する傾向は,顕著な実験的な課題を提示しています.この記事では,pH6で1Mのカリウムリン酸バッファを調製するための詳細なプロトコルを提供しています.5研究者たちに,彼らの実験ニーズに信頼性の高い解決策を提供します.
ポタシウム・フォスファート・バッファ,またゴモリ・バッファとしても知られる,単基型ポタシウム・フォスファート (KH) の混合物から成る2勤務地4) と二塩基カリウムリン酸 (K)2HPO4) このバッファシステムは,優れたバッファ容量,水溶性の高さ,コスト効率性など,いくつかの利点があります.研究者はこのバッファがカルシウムやマグネシウムのような金属離子と反応することを認識する必要がありますエタノール溶液に沉着物を形成する 核酸調製実験における重要な考慮事項である.
これらの限界にもかかわらず,カリウムリン酸ブッファーは科学研究における主要な材料であり,生化学反応,細胞培養システム,タンパク質浄化プロトコルバッファーのpHは,その2つのリン酸成分の比率を変更することによって正確に調整され,様々な実験要求に適応できる.
下記プロトコルは,pH6で1Mのカリウム・フォスファートバッファを1リットル調製する方法を詳細に示しています.5:
| 反応剤 | 分子重量 (g/mol) | 量 (g) | 最終濃度 (mM) |
|---|---|---|---|
| カリウム二水素リン酸 (KH)2勤務地4) | 136.09 | 95 | 698.067 |
| ディポタシウム・ホイドロゲン・フォスфат (K)2HPO4) | 174.18 | 52.5 | 301.412 |
準備プロトコル:
- 初期準備:適切な容器に800mlの蒸留水を加える.
- KHの解散2勤務地4:水に95gの単基塩酸カリウムが加えられ,完全に溶解するまで継続的に混ぜます.
- Kの解体2HPO4:溶液に 52.5 g の二塩基カリウムリン酸を混ぜ込み,継続して混ぜます.
- pH 調整:カリブレーションされたpHメーターを使用して,溶液を水素塩酸またはカリウムヒドロキシード溶液で水素塩酸6.5に慎重に調整します.追加間を徹底的に混ぜて,徐々に調整を実行.
- 最終音量調整:溶液を蒸留水で1リットルの最終容量まで持ち込み,徹底的に混ぜます.
- 滅菌:溶液を0.22μmの膜フィルターを通過して消毒し,凍結・解凍サイクルを最小限にするために無菌バッファをアリクォートします.
- 保存:濾過されたバッファを室温に保管します.長期保存の場合,4°Cに保管します.
- 反応剤の質:実験に不純物による干渉を防ぐために,分析等級またはより高い純度の試料を使用する.
- 水質:高品質の蒸留水や離子化水を使用することで 汚染物質が 侵入しないようにします
- pHメーターの校正:標準的なバッファで pH メーターを常に調整します.
- 混合する:調理のあらゆる段階において,徹底的に混ぜ合わせる.
- アセプティック技術:フィルタリング中に厳格な無菌状態を維持する.
- 保存条件:バッファーの整合性を保つため,涼しく暗く保管してください.
研究者は,濃縮した原料溶液 (5Mまたは10M) を後述の稀释のために準備することによって実験効率を向上させることができます.バッファーのpH範囲は,リン酸成分比を変化させることで変更することができる.塩化ナトリウムサプリメントによってイオン強度調整が達成できる.金属に敏感なプロセスを含む実験では,ケラ化剤としてEDTAを追加することを検討する.pH に 敏感 な 用途 に は,温度 制御 が 必要 です.
カリウムリン酸バッファーは多くの用途に有効に役立つが,特定の状況では代替バッファシステムが好ましいかもしれない.トリスのバッファは, リン酸 interference が問題であるときに, 価値のあることが証明されます.HEPESバッファは,細胞毒性が低いため,細胞培養アプリケーションに利点があります.バッファの選択は,実験的要求と潜在的な干渉の考慮に基づいて行われなければならない..
pH 6.5 で 1M カリウム・フォスファート・バッファの準備をマスターすることは 基本的な実験技術ですバッファーの特性と限界を理解すること実験を自信と精度をもって行うことができます