В лабораторных условиях исследователи часто сталкиваются с утомительным приготовлением буферных растворов.известный своей исключительной буферной способностью и отличной растворимостью в воде, стала незаменимой в различных научных дисциплинах, включая молекулярную биологию и ботанику.его склонность к реакции с некоторыми ионами металлов (например, кальция и магния) и осаждения в растворах этанола представляет значительные экспериментальные проблемыВ данной статье представлен подробный протокол приготовления буфера 1M фосфата калия при pH 6.5, предлагая исследователям надежное решение для их экспериментальных потребностей.
Буфер фосфата калия, также известный как буфер Гомори, состоит из смеси монобазичного фосфата калия (KH)2ПО4) и дибазического фосфата калия (K)2HPO4Эта буферная система имеет несколько преимуществ: превосходную буферную способность, высокую растворимость в воде и экономическую эффективность.Исследователи должны знать, что этот буфер реагирует с металлическими ионами, такими как кальций и магний., которые могут ингибировать активность ферментов и образуют осаждения в растворах этанола - критическое соображение для экспериментов по приготовлению нуклеиновых кислот.
Несмотря на эти ограничения, буферный фосфат калия остается основным в научных исследованиях.и протоколы очистки белкаpH буфера можно точно регулировать путем изменения соотношения двух его фосфатных компонентов, что делает его адаптивным к различным экспериментальным требованиям.
В следующем протоколе подробно описывается приготовление одного литра буфера 1М фосфата калия при pH 6.5:
| Реагент | Молекулярная масса (г/моль) | Количество (g) | Окончательная концентрация (mM) |
|---|---|---|---|
| Диводородный фосфат калия (KH)2ПО4) | 136.09 | 95 | 698.067 |
| Дипотазиевый водород фосфат (K)2HPO4) | 174.18 | 52.5 | 301.412 |
Протокол подготовки:
- Первоначальная подготовка:Добавить 800 мл дистиллированной воды в соответствующую емкость.
- Растворение KH2ПО4:Добавить 95 г монобазичного фосфата калия в воду, непрерывно перемешивая до полного растворения.
- Растворение К2HPO4:В раствор добавляют 52,5 г дибазисного фосфата калия с продолжением перемешивания.
- Корректировка pH:С помощью калиброванного рН-метра тщательно настроить раствор на рН 6,5, разбавленный соляной кислотой или гидроксидом калия.Выполните корректировки постепенно, тщательно смешивая между добавлениями.
- Окончательная корректировка объема:Добавить раствор до одного литра с дистиллированной водой и тщательно перемешать.
- Стерилизация:Раствор фильтруют через мембранный фильтр длиной 0,22 мкм для стерилизации.
- Хранение:Хранить фильтрованный буфер при комнатной температуре.
- Качество реагента:Использовать реагенты аналитического качества или более высокой чистоты, чтобы предотвратить вмешательство в эксперименты от примесей.
- Качество воды:Используйте высококачественную дистиллированную или деионизированную воду, чтобы избежать попадания загрязнителей.
- Калибровка pH-метра:Перед использованием всегда калибрируйте pH-метр стандартными буферами.
- Смешивание:Обязательно перемешивайте во время всех этапов приготовления.
- Асептическая техника:Поддерживать строгие стерильные условия во время фильтрации.
- Условия храненияХранить в прохладных темных условиях, чтобы сохранить целостность буфера.
Исследователи могут повысить эффективность эксперимента путем подготовки концентрированных исходных растворов (5M или 10M) для последующего разбавления.Диапазон pH буфера может быть изменен путем изменения соотношения компонентов фосфатовВ экспериментах, включающих металлически чувствительные процессы, следует рассмотреть возможность добавления ЭДТА в качестве хелатирующего агента.Контроль температуры необходим для применения, чувствительного к pH.
В то время как буфер фосфата калия эффективно служит многим приложениям, альтернативные буферные системы могут быть предпочтительнее в особых обстоятельствах.Трис-буфер оказывается ценным, когда фосфатные помехи являются проблемой.В то время как буфер HEPES предлагает преимущества для клеточных культур из-за его более низкой клеточной токсичности.При выборе буфера следует руководствоваться экспериментальными требованиями и возможными соображениями, связанными с помехами..
Овладение приготовлением буфера 1М фосфата калия при pH 6,5 представляет собой фундаментальное лабораторное навыки.в сочетании с пониманием свойств и ограничений буфера, позволяет исследователям проводить эксперименты с уверенностью и точностью.