प्रयोगशालाओं में शोधकर्ताओं को अक्सर बफर समाधानों की थकाऊ तैयारी का सामना करना पड़ता है।अपनी असाधारण बफरिंग क्षमता और उत्कृष्ट जल घुलनशीलता के लिए प्रसिद्ध, आणविक जीव विज्ञान और वनस्पति विज्ञान सहित विभिन्न वैज्ञानिक विषयों में अपरिहार्य हो गया है।इसकी कुछ धातु आयनों (जैसे कैल्शियम और मैग्नीशियम) के साथ प्रतिक्रिया करने और इथेनॉल समाधानों में अवशोषित होने की प्रवृत्ति उल्लेखनीय प्रयोगात्मक चुनौतियां पेश करती हैयह लेख पीएच 6 पर 1 एम पोटेशियम फॉस्फेट बफर तैयार करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है।5, शोधकर्ताओं को उनकी प्रयोगात्मक जरूरतों के लिए एक विश्वसनीय समाधान प्रदान करता है।
पोटेशियम फॉस्फेट बफर, जिसे गोमोरी बफर के नाम से भी जाना जाता है, में मोनोबेसिक पोटेशियम फॉस्फेट (KH) का मिश्रण होता है।2पीओ4) और डिबासिक पोटेशियम फॉस्फेट (K)2एचपीओ4) इस बफर प्रणाली के कई फायदे हैंः बेहतर बफर क्षमता, उच्च जल घुलनशीलता और लागत प्रभावीता।शोधकर्ताओं को पता होना चाहिए कि यह बफर कैल्शियम और मैग्नीशियम जैसे धातु आयनों के साथ प्रतिक्रिया करता है, जो एंजाइम गतिविधि को बाधित कर सकता है, और इथेनॉल समाधानों में अवशोषित हो सकता है। न्यूक्लिक एसिड तैयारी प्रयोगों के लिए एक महत्वपूर्ण विचार।
इन सीमाओं के बावजूद, पोटेशियम फॉस्फेट बफर वैज्ञानिक अनुसंधान में एक मुख्य घटक बना हुआ है। यह जैव रासायनिक प्रतिक्रियाओं, कोशिका संस्कृति प्रणालियों,और प्रोटीन शुद्धिकरण प्रोटोकॉलबफर के पीएच को उसके दो फॉस्फेट घटकों के अनुपात को संशोधित करके सटीक रूप से समायोजित किया जा सकता है, जिससे यह विभिन्न प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुकूल हो सकता है।
निम्नलिखित प्रोटोकॉल में 1 एम पोटेशियम फॉस्फेट बफर का एक लीटर पीएच 6 पर तैयार करने का विवरण दिया गया है।5:
| अभिकर्ता | आणविक भार (जी/मोल) | मात्रा (जी) | अंतिम एकाग्रता (एमएम) |
|---|---|---|---|
| पोटेशियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट (KH)2पीओ4) | 136.09 | 95 | 698.067 |
| डिपोटेशियम हाइड्रोजन फॉस्फेट (K)2एचपीओ4) | 174.18 | 52.5 | 301.412 |
तैयारी प्रोटोकॉलः
- प्रारंभिक तैयारी:एक उपयुक्त कंटेनर में 800 मिलीलीटर आसुत जल डालें।
- केएच का विघटन2पीओ4:95 ग्राम मोनोबेसिक पोटेशियम फॉस्फेट को पानी में मिलाकर पूरी तरह से भंग होने तक लगातार हिलाते रहें।
- के का विघटन2एचपीओ4:52.5 ग्राम डायबेसिक पोटेशियम फॉस्फेट को निरंतर हलचल करते हुए समाधान में मिलाएं।
- पीएच समायोजनःएक कैलिब्रेटेड पीएच मीटर का उपयोग करके, हल को ध्यान से 6.5 के पीएच पर पतला हाइड्रोक्लोरिक एसिड या पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड समाधान के साथ समायोजित करें।जोड़ों के बीच पूरी तरह से मिश्रण के साथ धीरे-धीरे समायोजन करें.
- अंतिम वॉल्यूम समायोजनःघोल को एक लीटर की अंतिम मात्रा तक डिस्टिल किए हुए पानी के साथ लाएं और अच्छी तरह मिलाएं।
- नसबंदी:निर्जंतुकीकरण के लिए 0.22 माइक्रोन के झिल्ली फिल्टर के माध्यम से समाधान को फ़िल्टर करें। फ्रीज-डिफॉल्ट चक्र को कम करने के लिए निर्जंतुकीकृत बफर को अलिकोट करें।
- भंडारणःफ़िल्टर किए गए बफर को कमरे के तापमान पर रखें। लंबे समय तक भंडारण के लिए 4°C पर रखें।
- अभिकर्मक की गुणवत्ता:अशुद्धियों से प्रयोगात्मक हस्तक्षेप को रोकने के लिए विश्लेषणात्मक ग्रेड या उच्च शुद्धता वाले अभिकर्मकों का प्रयोग करें।
- जल की गुणवत्ता:दूषित पदार्थों के प्रवेश से बचने के लिए उच्च गुणवत्ता वाले आसुत या निर्जंतुकीकृत पानी का प्रयोग करें।
- पीएच मीटर कैलिब्रेशनःउपयोग से पहले हमेशा मानक बफर के साथ पीएच मीटर को कैलिब्रेट करें।
- मिश्रण:तैयारी के सभी चरणों के दौरान पूरी तरह से मिश्रण सुनिश्चित करें।
- एसेप्टिक तकनीक:फिल्ट्रेशन के दौरान सख्त बाँझ परिस्थितियों को बनाए रखें।
- भंडारण की शर्तें:बफर की अखंडता बनाए रखने के लिए ठंडे, अंधेरे में रखें।
शोधकर्ता बाद में पतला करने के लिए केंद्रित स्टॉक समाधान (5M या 10M) तैयार करके प्रयोगात्मक दक्षता बढ़ा सकते हैं।बफर के पीएच रेंज को फॉस्फेट घटक अनुपात को बदलकर संशोधित किया जा सकता हैधातु-संवेदनशील प्रक्रियाओं को शामिल करने वाले प्रयोगों में, एक केलेटिंग एजेंट के रूप में ईडीटीए जोड़ने पर विचार करें।पीएच-संवेदनशील अनुप्रयोगों के लिए तापमान नियंत्रण आवश्यक है.
जबकि पोटेशियम फॉस्फेट बफर कई अनुप्रयोगों को प्रभावी ढंग से पूरा करता है, विशेष परिस्थितियों में वैकल्पिक बफर प्रणाली बेहतर हो सकती है।जब फॉस्फेट हस्तक्षेप समस्याग्रस्त होता है तो ट्राइस बफर मूल्यवान साबित होता है, जबकि एचईपीईएस बफर कम सेलुलर विषाक्तता के कारण सेल संस्कृति अनुप्रयोगों के लिए फायदे प्रदान करता है।बफर का चयन प्रयोगात्मक आवश्यकताओं और संभावित हस्तक्षेप पर विचार से निर्देशित किया जाना चाहिए.
पीएच 6.5 पर 1 एम पोटेशियम फॉस्फेट बफर की तैयारी में महारत हासिल करना एक मौलिक प्रयोगशाला कौशल का प्रतिनिधित्व करता है।बफर के गुणों और सीमाओं की समझ के साथ संयुक्त, शोधकर्ताओं को आत्मविश्वास और सटीकता के साथ प्रयोग करने में सक्षम बनाता है।